Làm thế nào để tránh những hiểu lầm phổ biến trong việc sử dụng các mẹo pipet liên kết thấp?

Mẹo pipet ràng buộc thấp Có thể giảm đáng kể dư lượng mẫu do thiết kế bề mặt bên trong kỵ nước của chúng và đặc biệt phù hợp để xử lý các thuốc thử đắt tiền, chất lỏng nhớt hoặc mẫu dấu vết (như protein và axit nucleic). Tuy nhiên, nếu chúng không được vận hành đúng cách, chúng vẫn có thể ảnh hưởng đến độ chính xác và độ lặp lại của thí nghiệm. Sau đây là phân tích các lỗi và giải pháp phổ biến được sử dụng kết hợp với các thông số kỹ thuật vận hành trong phòng thí nghiệm:

Hiểu lầm 1: Bỏ qua việc rửa đầu của đầu

Hoạt động sai: Trực tiếp hút mẫu và bỏ qua bước dưới độ thấp.

Tác động: Mặc dù các đầu pipet liên kết thấp có thể làm giảm dư lượng, đối với các mẫu như huyết thanh, protein hoặc dung môi hữu cơ, các bức tường bên trong của chúng vẫn có thể tạo thành một màng siêu lỏng do sức căng bề mặt, dẫn đến thể tích ống ban đầu thấp.

Cách tiếp cận chính xác: Trước khi pipeting chính thức, lặp lại việc xả hút 2 đến 3 lần với cùng một mẫu để tạo thành một lớp màng chất lỏng ổn định trên thành bên trong của đầu (ngoại trừ chất lỏng nhiệt độ cao/nhiệt độ thấp).

Hiểu lầm 2: Tốc độ nguyện vọng quá nhanh hoặc góc nghiêng

Hoạt động sai: Khát vọng chất lỏng nhanh chóng hoặc pipet bị nghiêng hơn 20 °.
Sự va chạm:

Pipet quá nhanh: Bong bóng hoặc hút lưng (chất lỏng lao vào pipet và làm ô nhiễm piston);
Pipet nghiêng: Thay đổi áp suất bề mặt chất lỏng, dẫn đến thể tích ống không chính xác và tăng thể tích dư. Cách tiếp cận chính xác:
Pipet từ từ và giải phóng chậm: hoạt động ở tốc độ không đổi và kiểm soát tốc độ giải phóng piston;
Giữ theo chiều dọc: Giữ góc nghiêng ≤20 ° khi đầu pipet được ngâm trong bề mặt chất lỏng.
Hiểu lầm 3: Bỏ qua sự khác biệt hoạt động của chất lỏng nhớt
Hoạt động sai: Sử dụng cùng tốc độ pipet như chất lỏng thông thường cho các mẫu có độ nhớt cao (như glycerol và huyền phù tế bào).
Tác động: Chất lỏng nhớt chảy chậm trên thành bên trong của đầu pipet và xả nhanh sẽ gây ra sự gia tăng đáng kể về thể tích còn lại, bù đắp các lợi thế của thiết kế hấp phụ thấp.
Cách tiếp cận chính xác:

Mở rộng thời gian ngâm: Ở trong bề mặt chất lỏng trong 1 giây sau khi hút trước khi tháo nó và tạm dừng trong 1 giây trước khi nhấn bánh răng thứ hai để thổi chất lỏng khi xả;
Chọn một đầu pipet miệng rộng: Đối với các mô hình tế bào hoặc mẫu tế bào, sử dụng đầu pipet hấp thụ thấp miệng rộng (lớn hơn 70% so với khẩu độ tiêu chuẩn) để giảm lực cắt.
Quan niệm sai lầm 4: Đánh mạnh khi cài đặt đầu
Hoạt động sai: Liên tục đánh tay cầm pipet để "siết" đầu.
Hiệu quả: Tác động lâu dài sẽ làm hao mòn các thành phần niêm phong pipet, phá hủy độ kín khí và gây ra rò rỉ hoặc lỗi âm lượng.
Phương pháp chính xác: Chèn pipet theo chiều dọc vào đầu, nhấn nhẹ và hơi xoay trái và phải để phù hợp.

Quan niệm sai lầm 5: Lưu trữ hoặc tái sử dụng không chính xác
Hoạt động sai:

Đặt pipet phẳng khi có chất lỏng dư vào đầu;
Tái sử dụng các mẹo hấp thụ thấp dùng một lần để tiết kiệm chi phí. Sự va chạm:
Đặt phẳng gây ra dòng chảy của chất lỏng để ăn mòn lò xo piston;
Tái sử dụng có thể ảnh hưởng đến độ chính xác do ô nhiễm chéo hoặc biến dạng cấu trúc. Phương pháp đúng:
Loại bỏ đầu ngay sau khi lên đường, và treo pipet theo chiều dọc;
Tái sử dụng bị nghiêm cấm, đặc biệt là khi nói đến các thí nghiệm nhạy cảm như PCR và đồng vị.
Lời khuyên chuyên nghiệp: Tối đa hóa lợi thế của các mẹo giữ thấp
Khớp với các thuộc tính của chất lỏng:
Chất lỏng dễ bay hơi (như chloroform): Tránh sử dụng các mẹo giữ thấp thông thường và sử dụng các mẹo an toàn dung môi hoặc các pipet piston bên ngoài được thiết kế cho thuốc thử dễ bay hơi.
Xác minh hiệu chuẩn:
Thường xuyên cân trọng trọng lượng của nước tinh khiết với số dư phân tích (1ML = 0,9982G ở mức 20) để xác minh xem khối lượng thực tế có đáp ứng tiêu chuẩn hay không.
Tóm tắt các điểm chính: Mẹo bảo trì thấp cải thiện độ chính xác bằng cách giảm mất mẫu, nhưng nếu các chi tiết của hoạt động bị bỏ qua, nó vẫn có thể phản tác dụng. Cài đặt tiêu chuẩn hóa, kiểm soát tốc độ, thích ứng với các đặc điểm mẫu và sử dụng nghiêm ngặt là cơ sở để đạt được các thí nghiệm lặp lại cao.